Come migliorare l'efficienza e l'economia del processo nella produzione di peptidi
I peptidi rappresentano una classe unica di composti farmaceutici con notevoli proprietà biochimiche e terapeutiche. Come agenti terapeutici, essi vantano un’elevata attività per unità di massa, una grande diversità chimica e biologica, e una bassa tossicità.
Molti peptidi fungono da molecole di segnalazione naturale per numerose funzioni fisiologiche, rendendoli promettenti per interventi terapeutici che imitano i percorsi naturali. Possono essere utilizzati come “terapie sostitutive” per integrare o sostituire gli ormoni peptidici quando i livelli endogeni sono insufficienti o assenti.
Tuttavia, i requisiti di purezza per i peptidi terapeutici sono estremamente rigorosi.
La sintesi peptidica spesso produce una miscela grezza che può contaminare le colonne per cromatografia a fase inversa (RPC) – metodo comunemente utilizzato per la purificazione dei peptidi. Le impurezze possono essere causate da effetti cumulativi delle sequenze fallite – dovute a delezioni, inserzioni, troncamenti o aggregazioni dei peptidi – e la loro rimozione varia a seconda del metodo di produzione.
Proteggi la tua colonna RPC e migliora la purezza con una fase ortogonale a monte!
Grazie all’introduzione di una fase di purificazione ortogonale a monte, è possibile migliorare significativamente la resa delle analisi e la purezza del peptide, ottenendo risultati eccellenti a costi inferiori. Questo approccio, quindi, riduce il carico sulla colonna RPC e ne prolunga la durata.
L’aggiunta di una fase a monte è una scelta efficace quando si tratta di campioni altamente impuri, sia a causa di sequenze sintetiche fallite che di contaminazioni batteriche.
Nel caso di sintesi peptidica, la purezza può essere migliorata mediante un metodo di separazione ortogonale.
Per quanto riguarda la contaminazione batterica, una fase a monte con una resina resistente al CIP (cleaning in place) migliorerà significativamente la durata della colonna RPC.
Entrambi questi approcci possono essere implementati introducendo una fase di cromatografia a scambio ionico (IEX) prima della colonna RPC ad alte prestazioni a base di silice.
Quali resine IEX vengono utilizzate per la purificazione dei peptidi?
Le moderne resine IEX si basano su polimeri come metacrilato e polistirene o matrici a base di agarosio.
Scegliere la migliore resina IEX per la purificazione dei peptidi prima dell’RPC significa valutare una serie di fattori:
Resa e purezza
- Le proprietà superficiali devono essere favorevoli alla purificazione del peptide in questione, con un basso legame non specifico.
- La scelta della resina cationica o anionica dipende dalla sequenza peptidica.
- Il livello di reticolazione deve fornire più “pareti” nelle sfere e una maggiore area superficiale accessibile sia per l’accoppiamento del ligando che per le molecole bersaglio. Ciò favorisce sia la resa che la purezza.
Velocità di separazione
- Le sfere più piccole consentono un trasporto di massa più veloce.
- La reticolazione con un distanziatore corto rende la catena più rigida, consentendo di sopportare una portata lineare più elevata per ridurre il tempo di processo.
Resistenza ai prodotti chimici per CIP rigorosi
- La resina deve avere un’elevata stabilità chimica per semplificare la pulizia sul posto e allungare la vita della colonna.
